Jedná se o vytrvalou, 20–60 cm vysokou a lysou bylinu. Lodyhy má přímé, hlavními i vedlejšími lištami 4hranné, při bázi červenohnědé. Listy jsou přisedlé za okrajovou bází, nejčastěji eliptické až široce eliptické, někdy i vejčité a zpravidla tupé. Květenství tvoří chudé a řídké koncové vidlany. Květy jsou 20–30 mm velké, s kališními lístky široce vejčitými až vejčitě kopinatými. Korunní lístky jsou spíše okrouhle vejčité, zlatožluté a ve špičce žláznatě tečkované a čárkované. Plodem jsou tobolky s velkými hustými podélnými žebry.Roste na loukách, pastvinách, prameništích, mýtinách, ve vlhkých a smíšených lesích a v jejich lemech. Třezalka skvrnitá je druhem se širokou ekologickou a cenologickou amplitudou a není náročná na živiny. V nižších polohách je ale vázaná na vlhčí a chladnější stanoviště. Glykosidicky vázané červené barvivo hypericin působí jako sedativum a psychofarmakum, proto se třezalka už staletí používá jako uklidňující prostředek.